实验准备

1. 材料：新鲜组织样本（如脂肪组织、肝脏组织等）、4%多聚甲醛固定液、60%异丙醇、油红O储备液（0.5g油红O溶于100ml异丙醇）、油红O工作液（使用前将油红O储备液与蒸馏水按3:2混合，过滤后使用）、苏木精染液、1%盐酸酒精分化液、伊红染液、中性树胶、载玻片、盖玻片、染色缸、光学显微镜等。

2. 仪器设备：切片机、恒温箱、微量移液器、离心机、天平。

样本处理

1. 固定：取适量新鲜组织样本，立即放入4%多聚甲醛固定液中，固定4-24小时，使组织细胞形态和结构保持稳定。固定时间根据组织大小和类型适当调整。

2. 脱水与包埋：固定后的组织依次经过不同浓度的乙醇（70%、80%、90%、95%、100%）进行脱水，每个浓度浸泡1-2小时。脱水后用二甲苯透明，再浸入融化的石蜡中进行包埋，制成石蜡块。

切片与脱蜡

1. 切片：使用切片机将石蜡块切成4-6μm厚的切片，将切片展平后贴于载玻片上。

2. 脱蜡：将载玻片依次放入二甲苯I、二甲苯II中各浸泡10-15分钟，以去除石蜡。然后依次经过100%、95%、90%、80%、70%乙醇溶液各浸泡5分钟，进行梯度水化。

油红O染色

1. 染色：将水化后的切片浸入油红O工作液中，37℃恒温染色10-20分钟。染色时间可根据实际情况进行调整，观察脂质呈橘红色即可。

2. 分化：染色结束后，用60%异丙醇快速分化数秒，去除多余染料，使背景清晰。

3. 复染：用蒸馏水冲洗切片后，浸入苏木精染液中染色3-5分钟，对细胞核进行复染。

4. 分化与返蓝：将切片浸入1%盐酸酒精分化液中数秒，然后用自来水冲洗10-15分钟进行返蓝，使细胞核清晰呈现蓝色。

封片与观察

1. 复染（可选）：若需要对细胞质进行复染，可将切片浸入伊红染液中染色1-2分钟。

2. 脱水与透明：依次将切片放入70%、80%、90%、95%、100%乙醇溶液各浸泡3-5分钟进行脱水，再放入二甲苯I、二甲苯II中各浸泡5-10分钟进行透明。

3. 封片：在切片上滴加适量中性树胶，盖上盖玻片，避免产生气泡，自然晾干或烘干。

4. 观察：将封片后的切片置于光学显微镜下，先用低倍镜观察整体形态，再用高倍镜观察脂质的染色情况，记录结果并拍照。

文章出自：验外实包   想了解更多请关注：http://www.dj-cro.com/